再谈全基因合成

理论终于上升到实践，呵呵，用两步法PCR合成400bp的基因成功！

采用前面文献介绍的两步法思路，做了一些改动（简化），去除了回收和T7核酸内切酶I酶切步骤。

测序100％正确，真是让人开心！这个实验中的小插曲让我对PCR反应和Pfu酶又有了新的认识（这个暂时保密，呵呵）。

Published 2007-5-19 7:50 作者 shininglake
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评论

# re: 再谈全基因合成

2007年5月21日 9:32 作者 biaobiao
虽然不懂。先恭喜楼主了~~~
合成DNA不是找公司合成吗？

# re: 再谈全基因合成

2007年5月21日 9:36 作者 shininglake
公司的贵啊.大约贵3、4倍吧

# 全基因合成

2007年5月21日 10:56 作者 qiaoqing
我一直关注博主很久了,哈哈恭喜了
可否把你的实验方法详细说说啊?

# re: 再谈全基因合成

2007年5月30日 18:00 作者 sysuer
高老师：您好！请教我做３＇Race得到５kb的片段，我已经把它连到P _T20和P_T easy上，但是都无法连进去，请问能有好的方法吗？谢谢

# re: 再谈全基因合成

2007年5月30日 22:37 作者 shininglake
糊涂了，"已经……无法连进去"倒底连进去没有啊，呵呵。只是P出来，没有连进去吧。
3‘RACE用的什么酶？连接转化有没有做对照？

# re: 再谈全基因合成

2007年5月31日 15:22 作者 sysuer
3'race 用la taq(TAKARA),　PCR 产物是5kb,　我已经试过用PMD-20t 和Pgemt- easy载体连接转化，都无法连接上，而其他短片段均可连接转化成功，是什么原因呀？

# re: 再谈全基因合成

2007年5月31日 15:34 作者 shininglake
转大片段确实比较困难，你的感受态效率高吗？不行用公司做的感受态。看看说明书，把条件尽量优化，比如外源浓度、纯度、外源与载体的摩尔比等。

# re: 再谈全基因合成

2008年9月20日 20:16 作者 zhihua.zheng

高老师,您好! 看了您写的这个文章,对您的这个技术非常感兴趣,不知道是否可以指导下我? 我是学生物信息的,面对的就是程序和数据,我很想能把自己的理论和实际结合起来.

不知道能否指点下我您的这个技术?

zhihua.zheng#gmail.com

(修改#为@)

希望能收您的邮件。谢谢！

# re: 再谈全基因合成

2010年6月21日 22:21 作者 happysyn

现在作基因合成, 已经很便宜了, 有的公司甚至只需2.6元/碱基, 比自己作还便宜.

# re: 再谈全基因合成

2007年5月21日 9:36 作者 shininglake

公司的贵啊.大约贵3、4倍吧